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激光共聚焦顯微鏡的制樣流程有哪些細節(jié)需要注意

返回列表 來源:本站 發(fā)布日期:2025-02-28 10:34:03【

激光共聚焦顯微鏡的制樣流程涉及多個關鍵步驟,每個步驟中的細節(jié)都至關重要,以確保*終制備的樣品能夠在顯微鏡下獲得高質(zhì)量的成像結(jié)果。以下是一些需要注意的細節(jié):

一、樣品選擇與準備

樣品類型:

可以是固定的或活的組織,也可以是固定的或活的貼壁培養(yǎng)細胞。

對于懸浮細胞或懸浮粒子,應使用共聚焦顯微鏡專用的培養(yǎng)皿承載樣品進行觀察。

激光共聚焦顯微鏡VSPI.jpg

樣品狀態(tài):

樣品必須貼壁良好,不能懸浮,并需要在載玻片上固定好后送樣測試。

樣品應具備較好的生物活性和顯微結(jié)構。

二、載玻片與蓋玻片的選擇與處理

載玻片:

選擇質(zhì)量好、光潔、無雜質(zhì)的載玻片。

厚度應在0.81.2mm之間(也有說法認為應在82mm之間),以確保其光學特性穩(wěn)定。

蓋玻片:

蓋玻片應保持干凈光潔,厚度應小于0.17mm。

蓋玻片使用前需用玻璃洗液浸泡處理一天以上,鉻酸浸泡過夜,去離子水沖洗掉殘存的洗液后,再用無水乙醇浸泡待用。臨用前需在酒精燈上過火滅菌處理。

三、熒光染料的選擇與標記

染料選擇:

由于激光共聚焦顯微鏡使用單一波長的激光作為光源,因此熒光染料的選擇應根據(jù)激光器的波長來確定。

如果在同一樣品中有多種熒光染料標記,應確保它們的發(fā)射波長不重疊,以避免串色問題。

標記方法:

樣品需經(jīng)熒光探針標記(可單標、雙標、三標),標記方法應確保染料與樣品充分結(jié)合且不影響樣品的生理狀態(tài)。

四、樣品的固定與封片

固定方法:

對于需要固定的樣品(如組織切片),應采用適當?shù)墓潭▌┻M行處理,以確保樣品形態(tài)的穩(wěn)定性和染色的均勻性。常用的固定劑有甲醛、乙醇等。

封片處理:

如果樣品只需觀察一次且不易淬滅熒光,可使用一定濃度的甘油混合物封膜。

如果樣品需要放置一段時間并多次拍攝,應使用抗熒光淬滅的封片劑以減少熒光信號的損失。

五、其他注意事項

樣品厚度:

樣品的厚度應適中,一般為1~2mm,以便于激光穿透和成像。

操作規(guī)范:

在制備樣品過程中應嚴格遵守操作規(guī)程,避免污染和損壞樣品。

使用共聚焦顯微鏡時,需要注意開機和關機順序,以及操作過程中的環(huán)境穩(wěn)定性和樣品適宜性。

安全防護:

激光共聚焦顯微鏡中的激光發(fā)射管使用壽命有限且價格昂貴,因此在操作過程中應注意保護激光管免受損壞。

應避免暴露在中等功率和高功率的激光輻射中,特別是不要注視激光束。

儀器管理:

激光共聚焦顯微鏡作為使用率極高的大型精密儀器,其正常運轉(zhuǎn)離不開科學的日常管理。應指定儀器負責人負責儀器的開關機、日常維護和狀態(tài)檢查等工作。

綜上所述,激光共聚焦顯微鏡的制樣流程涉及多個方面的注意事項,包括樣品選擇與準備、載玻片與蓋玻片的選擇與處理、熒光染料的選擇與標記、樣品的固定與封片以及其他操作規(guī)范和安全防護等。只有嚴格遵守這些注意事項,才能確保獲得高質(zhì)量的成像結(jié)果并保護儀器免受損壞。

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